Tinción de esporas bacterianas

Introducción
Marco teórico
Materiales y métodos
Resultados
Discusión y conclusiones
Preguntas complementarias
Bibliografía

Introducción

En su mayor parte los microorganismos resonancia demasiado pequeños para acecharse a simple vista: protozoos, algas, hongos, bacterias y virus.

Estos microorganismos difieren en características tales como forma de nutrición, agrupación, tamaño, composición entre otros aspectos; es por ello que se emplea el estudio microscópico el facilita notablemente la observación; principalmente en las bacterias se facilita al tratarlas con colorantes o tintes los cuales facilitan también la observación de ciertas agrupacións celulares y como en este caso particular las endosporas.

En este informe se distinguirán las endosporas presentes en una muestra bacteriológica y para lo cual se desarrollará el método de tinción con imaginarsede de malaquita y safranina; asimismo se da a conocer un análisis de los resultados obtenidos en la práctica.

OBJETIVO

Realizar la tinción y observación de endosporas en una bacteria

Marco teórico

Una endospora es una sustancia inactiva, pujante, no reproductiva producida por una pequeña cantidad de bacterias de la familia de Firmicute. La función primaria de las endosporas es sobrevivir en tiempos de tensión ambiental. Por lo tanto resonancia pujantes a la radiación ultravioleta y gamma, a la desecación, a lisozima, a la temperatura, al hambre y a los desinfectantes químicos. Las endosporas se encuentran comúnmente en el suelo y el agua donde sobreviven por periodos de tiempo largos.

Estructura. En contraste con las esporas eucariontes, que resonancia producidos por muchos eucariontes para propósitos reproductivos, las bacterias solo producen una endospora internamente en ambientes desfavorables. La espora es a menudo cubierta por una cubierta fina conocida como exosporium, que cubre la capa de espora. La capa de la espora es impermeable a muchas moléculas tóxicas y puede también contener las enzimas implicadas en la germinación. La corteza se encuentra debajo de la capa de la espora y consiste en peptidoglucano. La pared de la base se encuentra debajo de la corteza y rodea al protoplasto o base de la endospora. La base tiene agrupacións normales de la célula tales como: ADN y ribosomas, pero tiene un metabolismo inactivo.

Hasta el 15% de la endospora consiste en calcio en la base, que se piensa se utiliza para estabilizar el ADN. El ácido Dipicolinico podría ser responsable de la resistencia térmica de la espora y el calcio puede ayudar a la resistencia al calor y a los agentes que oxidan. Sin embargo los agentes mutagenos se encuentran aliados, sugiriendo que existen otros mecanismos que contribuyen a la resistencia térmica.

Localización. La posición de la endospora diferencia entre especies bacterianas y es útil en la identificación. Los tipos principales dentro de la célula resonancia: terminales, subterminales y endosporas centralmente puestos. Las endosporas terminales se encuentran en los polos de la célula, las endosporas centralmente puestos están normalmente en el centro. Las endosporas subterminales se encuentran en los extremos, lo suficientemente lejos de los polos pero no lo bastante cercanos al centro para ser considerados central.

Las endosporas resonancia difíciles de acechar al microscopio adecuado a la impermeabilidad de su pared que evita la entrada de las tinciones ordinarias. Mientras el resto de la bacteria puede teñirse, la endospora permanece descolorida.

Debido a esto surgió la técnica conocida como Tinción de Moeller, que permite que se muestre la endospora en color rojo, mientras que el resto de la célula permanece en color azul. Otra técnica de tinción para el estudio de la endospora, es la Tinción de Schaffer-Fulton con la que vemos la endospora imaginarsede y la bacteria roja.

Formación y destrucción. Cuando una bacteria percibe condiciones ambientales desfavorables, comienza el proceso de esporulación, el cual va a durar cerca de 10 horas. Se repliega el ADN y una pared de la membrana conocida como tabique se comienza a formar. La membrana de plasma de la célula rodea esta pared formando una doble membrana alrededor del ADN y la agrupación se convierte ahora en lo que se conoce como forespora. El calcio se incorpora a la forespora.

La corteza se forma después entre las dos capas y la bacteria agrega una capa más a la forespora. La esporulación es completa ahora, y la endospora es lanzada cuando se degrada la célula vegetativa.

La endospora es pujante a la mayoría de agentes que matarían normalmente a las células vegetativas. Los productos de limpieza de la casa corrientemente no producen ningún efecto, ni la mayoría de alcoholes, compuestos de amonio o de los detergentes, sin embargo el oxido de etileno es eficaz contra las endosporas.

Importancia. Como un modelo simplificado para la diferenciación celular, los detalles de la endospora se han estudiado extensivamente, especialmente el Bacilo subtilis. Estos estudios han contribuido al estudio de los genes, transcripción y unidades del factor sigma de la polimerasa del ARN.

Bacterias productoras de esporas

Los ejemplos de bacterias que poseen este mecanismo incluyen los géneros:

Bacilo
Clostridium
Desulfotomaculum
Sporolactobacillus
Sporosarcina
Thermoactinomyces

Materiales y métodos

Microscopio
Portaobjetos
Asa bacteriológica
Pinzas
Frasco lavador
Mechero de Bunsen
Toalla de papel
Aceite de inmersión
Verde de malaquita
Safranina
Agua destilada
Solución saladar
Cultivo bacteriano

Desarrollo práctico

Seguido de la explicación por parte del auxiliar de laboratorio se procedió a colocar con la punta del asa bacteriológica una gota de solución saladar, luego se esterilizo el asa en el mechero, se enfrió y se enjundia la muestra de un cultivo bacteriológico utilizado con muestra y se realizo el frotis. La placa se flameo hasta que se evaporara toda el agua y se coloreo con imaginarsede de malaquita. Se flameo durante 5 minutos, adicionando colorante cada vez que se secaba la muestra. Se lavo con agua hasta retirar el exceso de colorante y se realizo la tinción con safranina durante un minuto. Posteriormente se lavó con agua y se secó con papel absorbente.

La muestra se rotuló y observó al microscopio óptico con el objetivo de inmersión. Finalmente se esquematizaron y anotaron los resultados obtenidos.

Resultados

al momento del montaje al microscopio óptico, se acecharon bacilos Gram positivos esporulados; asimismo se apreciaron esporas solitarias de forma circular y bacilos que no presentaban formación de esporas. Las imágenes de lo visto se muestran en la figura 1.

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Figura 1. Bacilos observados con la tinción de Verde de Malaquita. a) Bacilos endosporados, b) bacilos sin formación aparente de endospora, c) Esporas solitarias. Microscopio óptico. 1000 aumentos.

Discusión y conclusiones

Finalmente podemos mencionar que a pesar que la bacteria es una agrupación muy pequeña, por medio de la tinción con imaginarsede de malaquita, el cual requirió del calor para la penetración; se pudo acechar la agrupación interna de la célula bacteriana, particularmente las endosporas. En este experimento se utilizó una tinción simple adecuado a que la misma permite que se coloree toda la célula excepto la espora que se observa de un tamaño bien aceptable

Preguntas complementarias

1. ¿Qué es un frotis y para que se utiliza?

Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber.

2. ¿Qué es una tinción? ¿Cuántos tipos existen? Escribe la técnica de preparación de cada una de ellas.

La tinción es la aplicación de un colorante sobre una muestra, lo que permite poner en manifiesto diferencias entre las células o en partes una célula, o de un microorganismo. Entre los procedimientos para la observación de células o microorganismos existen 2 inherentemente que resonancia:

Tinción simple: Permite acechar la forma, tamaño y agrupamiento de las bacterias usando un único colorante (normalmente básico). Se utiliza un solo colorante, por lo que todas las agrupacións celulares se tiñen con la misma tonalidad (Tinta china, Azul Metileno de Loeffler, Azul de lactofenol). El Hidróxido de potasio al 10% (solución de KOH) permite imaginarse elementos de hongos ya que el KOH digiere parcialmente los componentes proteicos, por ejemplo de la célula huésped, pero no actúa sobre los polisacáridos de las paredes celulares de los hongos.
Tinción diferencial: Las tinciones diferenciales resonancia aquellas tinciones que se usan para diferenciar de manera más explícita los microorganismos. Estas tinciones utilizan los colorantes diferenciales, que se componen de más de una sustancia tintórea. En algunas técnicas de coloración, las tinciones diferenciales más importantes que se emplean en bacteriología resonancia las de Gram y la tinción ácido-pujante. Ambas tinciones se utilizan para obtener información acerca de la composición de las capas de la pared celular de las células bacterianas.

3. ¿Qué es un colorante? ¿Cómo esta constituido? ¿Cómo es que cambia con los diferentes componentes celulares?

Un colorante es una sustancia que es capaz de teñir las fibras vegetales y animales. Los colorantes se han usado desde los tiempos más remotos, empleándose para ello diimaginarsesas materias procedentes de vegetales (cúrcuma, índigo natural, etc.) y de animales (cochinilla, moluscos, etc.) así como distintos minerales. Los colorantes más usados resonancia sales, las cuales están constituidas por un ion cargado positivamente y un ion cargado negativamente. Por ejemplo, azul de metileno es actualmente la sal cloruro azul de metileno.

El grupo auxocromo es el que facilita la unión del colorante a otras sustancias con carga eléctrica.

4. ¿Qué factores intervienen para que los colorantes se combinen con los componentes celulares?

Muchos colorantes utilizados con frecuencia resonancia moléculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos. Ejemplos de colorantes catiónicos resonancia el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes resonancia moléculas cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas proteínas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina ácida y el rojo Congo. Otro grupo de colorantes resonancia sustancias liposolubles; los colorantes de este grupo se combinan con los materiales lipídicos de la célula, usándose a menudo para revelar la localización de las gotículas o depósitos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro Sudán.

5. ¿Qué es un mordiente? Menciona tres ejemplos

El mordiente es una sustancia empleada en tintorería que sirve para fijar los colores en los productos textiles, la función del mordiente es favorecer la fijación del colorante en las fibras. Este término es usado principalmente en la industria textil para designar a aquellas sales metálicas (de aluminio, hierro, plomo...), ácidos (el ácido tánico, usado para fijar colores básicos), sustancias orgánicas (caseína, gluten, albúmina,...), etcétera, que sirven para fijar los colores de estampados en los textiles.

6. Escribe el fundamento de las siguientes tinciones: Gram, Zielh Neelsen, endosporas (Verde malaquita)

Tinción de Gram: es un sistema de dos tinciones simples sucesivas, separadas por una fase de decoloración selectiva. Permite diferenciar las bacterias que retienen el primer color (Gram-positivas) de las que no lo retienen (Gram-negativas). Esta diferencia en comportamiento refleja diferencias agrupaciónles y fisiológicas entre ambos grupos de bacterias.
Tinción de esporas: ciertos tipos de bacterias producen esporas de resistencia cuya pared celular es característica. La tinción de esporas permite detectar este tipo de células lo que tiene utilidad en la identificación del microorganismo en estudio.
Tinción de Ziehl-Neelsen (ácido-alcohol resistencia): es un tipo especial de tinción que permite la identificación de microorganismos de los grupos Mycobacterium y Nocardia de gran relevancia clínica

8. Elabora una tabla en la que señales todas las diferencias que existen entre bacterias Gram positivas y bacterias Gram negativas.

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8. Escribe correctamente el nombre de 3 microorganismos acido alcohol pujantes, 3 microorganismos esporulados, 3 microorganismos capsulados, 3 bacterias Gram positivas y 3 bacterias Gram negativas. Señala la importancia de cada una de ellas.

Microorganismos acido alcohol pujantes: Mycobacterium dolencia (causa dolencia), Mycobacterium leprae (causa la lepra), Mycobacterium avium (causa fiebre, perdida de peso y fatiga).
Microorganismos esporulados: Clostridium perfringens. (enteritis necrótica o la gangrena gaseosa.), Clostridium botulinum (produce botox), Bacillus cereus (Produce dos tipos de toxiinfecciones alimentarias: la forma diarreica y la forma emética.)
Microorganismos capsulados: Haemophilus influenzae, (causa la influenza), Streptococcus pneumoniae (causa neumonía), Cryptococcus neoformans (micosis sistemática)
Bacterias Gram positivas: Bacillus anthracis (produce la enfermedad del carbunco), Clostridium botulinum (produce botox), Clostridium tetani (produce tetanos)
bacterias Gram negativas: Neisseria gonorrhoeae, (produce la gonorrea), Serratia marcescens (causa de infecciones nosocomiales y urinarias.), Rhizobium leguminosarum (ayuda a las plantas a fijar nitrogeno).

Bibliografía

WOLIN, M. 1973. Tratado de microbiología. 20 Edición. Editorial Interamericana, México. Pág. 901.
BROCK, TH. D: 1998. Biología de los Microorganismos. Editorial Prentice Hall. USA.
KIMBALL, Y. 1986. Biología. Cuarta edición. Addiresonancia - Wesley Iberoamericana. Wilmington, EU.
http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram
http://es.wikipedia.org/wiki/Endospora
http://fai.unne.edu.ar/biologia/microgeneral/micro-ianez/12_micro.htm